支原體檢測(cè)與祛除試劑

通常情況下，細(xì)胞培養(yǎng)需要在嚴(yán)格的無(wú)菌條件下進(jìn)行，既包括無(wú)菌環(huán)境，也包括無(wú)菌操作。今天就“細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，環(huán)境的無(wú)菌控制"這一話題，給大家分享一些小技巧，希望可以給各位的實(shí)驗(yàn)提供幫助。

細(xì)胞培養(yǎng)所用的無(wú)菌室的結(jié)構(gòu)：

一般由更衣間、緩沖間、操作間三部分組成。

無(wú)菌室需進(jìn)行定期消毒和防污染處理：

1、采用每日（使用前）紫外照射（1－2小時(shí)）。

2、每周甲醛或過(guò)氧乙酸熏蒸（2小時(shí)），如果為了節(jié)省時(shí)間，也可以每周用新潔爾滅擦拭地面墻壁、桌面方式進(jìn)行消毒。另外，在實(shí)際操作過(guò)程中，還應(yīng)考慮無(wú)菌室建筑材料的差異來(lái)選擇合適的消毒方法。

3、防止無(wú)菌室的污染：通風(fēng)系統(tǒng)出風(fēng)口濾膜定期更換；進(jìn)出無(wú)菌室時(shí)，避免外界空氣直接對(duì)流進(jìn)無(wú)菌室的操作間。

4、定期使用支原體祛除試劑對(duì)桌面進(jìn)行噴灑或擦拭。

MB Mycoplasma-off™

祛除支原體噴霧劑（實(shí)驗(yàn)環(huán)境用）

細(xì)胞培養(yǎng)所用的超凈工作臺(tái)

超凈工作臺(tái)的工作原理：

鼓風(fēng)機(jī)將外界空氣抽進(jìn)超凈臺(tái)，通過(guò)高效過(guò)濾器凈化，祛除空氣中的微生物，凈化的空氣吹過(guò)超凈臺(tái)的內(nèi)部空間，而將塵埃、細(xì)菌、病毒顆粒帶走，使工作區(qū)構(gòu)成無(wú)菌環(huán)境。

由于氣流在超凈工作臺(tái)中多的流動(dòng)方向不同，因此可以將超凈工作臺(tái)分為側(cè)流式、直流式和外流式三種類型。

超凈臺(tái)的使用與保養(yǎng)：

1、超凈臺(tái)的平均風(fēng)速一般保持在0.32-0.48米/秒，過(guò)大、過(guò)小均不利于保持臺(tái)面潔凈。

2、使用前建議開啟超凈臺(tái)內(nèi)紫外燈照射30分鐘，然后打開通風(fēng)系統(tǒng)，讓超凈臺(tái)預(yù)工作3-5分鐘，以除去紫外線照射產(chǎn)生的臭氧。

3、使用完畢后，要用75%酒精將臺(tái)面和臺(tái)內(nèi)四周擦拭干凈，以保證超凈臺(tái)無(wú)菌。還要定期用支原體祛除試劑清潔超凈臺(tái)。

支原體常規(guī)PCR法其原理和熒光定量PCR是一樣的，根據(jù)支原體核糖體的特異保守序列設(shè)計(jì)引物，對(duì)待檢樣本DNA進(jìn)行擴(kuò)增，通過(guò)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物的大小分析作出判斷。

它的優(yōu)點(diǎn)是準(zhǔn)確度很高，特別是德國(guó)MB的試劑盒，不僅qPCR的靈敏度可以達(dá)到10CFU/ml以上，普通PCR的靈敏度也可以達(dá)到各國(guó)藥典的這個(gè)要求。

特異性強(qiáng)，*涵蓋所有可能感染細(xì)胞的支原體物種（涵蓋歐洲藥典規(guī)定的9種支原體），根據(jù)序列一致性，至少可以檢測(cè)到107種支原體物種。與細(xì)菌和真核DNA無(wú)交叉反應(yīng)。

操作比qPCR多了個(gè)跑電泳的步驟。

時(shí)間短，2-3小時(shí)可以出結(jié)果。

唯yi的限制，因?yàn)闄z測(cè)的是支原體的DNA，所以無(wú)法區(qū)分活的支原體。但生物制品在生產(chǎn)過(guò)程中，本身不應(yīng)該產(chǎn)生支原體污染，污染過(guò)也不行，所以這個(gè)限制反而變成了優(yōu)點(diǎn)。